·试剂盒规格、功能

Q1-1：本试剂盒中含有外泌体检测用的抗体吗？

A1-1：本试剂盒中不含外泌体检测用的荧光标记抗体。荧光素结合抗CD63抗体（产品编号：018-27641）和红色荧光色素结合抗CD63抗体（产品编号：011-27751），或者其他合适的荧光标记抗体需另行购买。

Q1-2：可以使用荧光标记二抗进行检测吗？

A1-2：可以，分离外泌体后，按照以下操作进行一抗反应、二抗反应和游离细胞计数法分析：

①混合未标记的一抗和外泌体捕获磁珠在室温下静置1h。在20min、40 min、1h的时候涡旋振荡约5s，搅拌磁珠；

②用300 uL WB（+Enhancer）清洗2次；

⑤用WB（+Enhancer）100倍稀释PE标记二抗（Jackson lmmuno Research Laboratories，产品编号：

115-115-164），添加②的磁珠；

④室温下静置1h。期间在20min，40min，1h的时候涡旋振荡约5秒，并搅拌磁珠；

⑤用300μLWB（+Enhancer）清洗3次；

⑥在300uL WB（+Enhancer）中重县磁珠；

⑦用流式细胞仪分析。

Q1-3：本试剂盒可以检测人以外的生物种的外泌体吗？

A1-3：可以。有人、小鼠、牛、猴子的使用实例。

Q1-4：MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS（产品编号：293-77601）适用于流式细胞术吗？

A1-4：MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS是纯化外泌体的试剂盒，不是流式细胞术检测用的试剂盒。PS CaptureTm 外泌体流式试剂盒的磁珠和Washing Buffer的成分是根据流式细胞术检测条件而优化的，所以请使用PS CaptureTM外泌体流式试剂盒。

·试剂盒的操作方法、组成

Q2-1：本试剂盒的操作时间需要多久？

A2-1：样品预处理约1h，试剂盒所有的步骤总计需要约2h+20min。具体包括：①与样品反应1h；②荧光标记抗体染色1h；③清洗约20min。

Q2-2：多个外泌体捕获磁珠可能与一个外泌体结合，造成磁珠聚集。这种情况下，能准确进行测试吗？

A2-2：建议根据前向角和侧向角散射光确定的单线态磁珠部分来调整设门参数，然后检测外泌体捕获磁珠在所选区域内的荧光信号。一般单线态磁珠占总体样本的50%～70%。

Q2-3：如何检测已纯化的外泌体样品？

A2-3：将纯化完成的外泌体稀释成适当的浓度后，按照使用说明书的2.细胞外囊泡的分离进行实验。稀释纯化外泌体时，请使用超纯净水10倍稀释的试剂盒配套的Washing Buffer（10×）。可检测出纯化外泌体的浓度范围为125~1000ng/mL。检测抗体建议使用抗CD63单克隆抗体（3-13），红色荧光色素（635）结合（产品编号：011-27751）。

Q2-4：用10种不同抗体检测时，所需的样品和磁珠的量是多少？

A2-4：请参考使用说明书的表2各反应数中试剂以及样品的使用量。表2中有说明10次反应量。用367uL的样品和110 μLExo5ome Capture Beads 反应并分离外泌体，用WB（+Enhancer）清洗后，在1，100uLWB（+Enhancer）中浮磁珠。然后，根据3免疫染色分成100uL一小份的步骤进行后续实验。

·样品用量

Q3-1：检测使用的样品的最低量是多少？

A3-1：1个样品需要33μL左右。但是，样品中所含的细胞外囊泡较少时，请将已经过离心处理的细胞培养上清进行超滤浓缩后再上样。（推荐超滤管：Sartorius Vivaspin20或者密理博的，截留分子量100K）

·相关产品

Q4-1：有销售磁力架吗？

A4-1：有的。Wakoh供应磁珠捕获用磁力架（产品编号：290-35591）。

·疑难

Q5-1：磁力架上的磁珠不集磁。

A5-1：本试剂盒的外泌体捕获磁珠针对流式细胞仪检测进行了优化，磁珠浓度降低。因此，有时用目测难以确认磁珠集磁。进行清洗操作前，将样品管在磁力架上静置至少1min，小心缓慢地进行移液操作且避免枪头吸到磁珠。