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上海宇劲生物孙经理 
| 品牌 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
| Wako | 058-09261 | EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent EV-Save™ 细胞外囊泡吸附抑制剂 | 1 ml |
说明书：
产品资料：
抑制细胞外囊泡对实验耗材的吸附
EV-Save™ 细胞外囊泡封闭试剂
本品是抑制细胞培养上清中的细胞外囊泡吸附于样本管或移液枪头等实验耗材的聚合物试剂。能防止实验和保存时细胞外囊泡吸附所引起的损耗，提高回收率。本品可在细胞外囊泡（含外泌体）的超滤、提取和保存前使用。
使用MagCapture™ Exosome lsolation Kit PS（产品编号：299-77603，293-77601）从细胞培养上清中提取外泌体时，搭配本品效果更佳。
·使用前提示
·在血清、血浆或杂质较多的样本中，本品的使用效果会受到影响。
·本品含有聚合物。若担心聚合物会影响后续实验的结果，请不要使用本品。
·特点
·抑制培养上清中或提取后细胞外囊泡对实验耗材的吸附
·用法简单，只需往样本中添加本品即可
·EV-Save™的吸附抑制效果——样本管
下面来验证一下，使用EV-Save™ 是否印制提取外泌体对试管的吸附。
实验条件
用MagCapture™ Exosome lsolation KitPS（产品编号：293-77601）从COLO201细胞的培养上清中提取出外泌体。
将3ng/uL外泌体放入试管中静置3分钟。然后用移液器转移到其他样本管，重复本步骤4次以上。
在含EV-Save™ 的实验组中，将EV-Save™ 按照1/100体积添加到样本中，然后进行移液。
使用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒（抗小鼠IgGPOD）（产品编号：297-79201）对外泌体的CD63信号进行定量，验证移液次数与外泌体减少比率的关系。
将移液前的CD63信号设定为100%，相对值见图表。
【结果】
在普通样本管和低蛋白吸附样本管中，移液操作都会引起外泌体减少。而添加EV-SaveM 几乎能完全抑制移液引起的外泌体损耗。
·EV-Save™的吸附抑制效果——同时使用MagCapture™ Exosome lsolation Kit PS
下面，在利用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS从TIG3细胞培养上清中提取外泌体的过程中，验证添加EV-Save™ 是否能抑制外泌体的损耗。
实验条件
使用MagCapture™ Exosome lsolation Kit PS，分别从1mL COLO201、TIG3和人iPS细胞的培养上清中提取外泌体，培养上清没有经过超滤浓缩。
提取外泌体时分别进行了以下两项操作，“往各个培养上清中添加/不添加EV-Save™"，"往MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS附带的Exosome Elution Buffer'中添加/不添加EV-Save™"。
使用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒（抗小鼠gGPOD）（产品编号：297-79201）对外泌体的CD63信号进行定量，并将其信号强度作为反应为外泌体量的标记。
假设移液前的CD63信号为100%，相对值见图表。
-/-：培养上清没有添加EV-Save™/"Exosome Elution Buffer"没有添加EV-Save™
-/+：培养上清没有添加EV-Save™/"Exosome Elution Buffer"添加了EV-Save™
+/+：培养上清添加了EV-Save™/"Exosome Elution Buffer"添加了EV-Save™
【结果】
添加了EV-Save™的TIG3的细胞培养上清及MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS附带的“Exosome Elution Buffer“实验组，比两者都没添加的实验组，外泌体的回收量增加了大约20%。
·超滤时EV-Save™的吸附抑制效果——人IPS细胞
接下来验证人iPS细胞培养上清在进行超滤（Vivaspin 20，100K）浓缩前后，是否有发生外泌体损耗。
超滤后，培养上清中的外泌体会损耗大约60%，但添加EV-Save™后，几乎能完全抑制超滤引起的外泌体损耗。
·EV-Save™的对细胞的毒性评估——人iPS细胞
接着，使用人iPS细胞检验EV-Save™的细胞毒性。将添加了1/100EV-Save™的达到1/5培养基量的TBS溶液加入培养基。人iPS细胞在配制好的培养基中培养3日，然后测量活细细胞数。
EV-Save™几乎不影响人iPS细胞的增殖。
·使用方法
使用MagCapture™ Exosome lsolation Kit PS（产品编号：299-77603，293-77601）提取细胞培养上清中的细胞外囊泡。
1.将EV-Save™细胞外泌体封闭试剂添加到细胞培养上清中，100倍稀释于细胞培养上清，上下颠倒或轻敲使其混合。
*细胞培养上清需要超减浓缩时，请在浓缩前添加本品。
2.按照MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS的说明书进行实验，直到“洗脱细胞外泌体“这一步。
3.将EV-Save™ 细胞外囊泡封闭试剂添加到MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS附带的"Exosome Elution Buffer"中，100倍稀释于“Exosome Elution Buffer"，颠倒或轻敲使其混合。
4.按照MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS说明书洗脱细胞外囊泡。
5.保存洗脱后的细胞外泌体，或者进行后续实验。
使用其他方法从细胞培养上清中提取细胞外泌体。
1.将EV-Save™ 细胞外囊泡封闭试剂添加到细胞培养上清中，100倍稀释于细胞培养上清，颠倒或轻敲使其混合。
2.将EV-Save™ 细胞外囊泡封闭试剂添加到所提取的细胞外囊泡中，100倍稀释于细胞外泌体储存液，颠倒或使其混合。
3.保存洗脱后的细胞外泌体，或者进行后续实验。
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相关资料：
1. | Jiang, L., Belinskaya, T., Zhang, Z., Chan, T. C., Ching, W. M., & Chao, C. C. (2021). Regulation of Serum Exosomal MicroRNAs in Mice Infected with Orientia tsutsugamushi. Microorganisms, 9 (1), 80.全文 |
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