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shRNA载体构建

首先设计根据需求设计shRNA引物一套，完成引物退火。将载体进行双酶切反应，双酶切后割胶回收。将shRNA和双酶切回收后的载体，使用试剂盒进行重组成环状片段，转入制备好的细菌感受态细胞，对长出的单克隆菌落送测序公司进行测序鉴定，比对正确的克隆即为构建成功的shRNA表达载体。

名称：shRNA载体构建

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一、实验原理
shRNA表达载体可分为质粒载体和病毒载体，目标siRNA与其反向互补序列之间由特定分连接序列间隔，得到的RNA两端反向互补退火，与连接序列形成茎环结构，类似发夹。携带目标基因shRNA的表达载体转染或转导到目标细胞中，载体表达shRNA并被Dicer酶切割为siRNA。就可以引发目标基因的沉默。
二、实验流程
1 shRNA靶点设计
2 合成模板：合成设计好的DNA并退火形成双链DNA，克隆岛客户要求的载体上。
3 测序鉴定
4 构建成功
三、公司服务
客户提供：需要干扰的目的基因
公司提供：测序报告、实验结果

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