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   宇劲生物
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质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单位,部分细胞器中也存在质粒,如线粒体、叶绿体。现在习惯上用来专指细菌(大肠杆菌)、酵母菌和放线菌等生物中细胞核或拟核中的DNA以外的DNA分子。

名称:质粒抽提
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一、实验原理
质粒抽提方法即去除RNA,将质粒与细菌基因组DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。
二、实验流程
Ⅰ.使用质粒提取试剂盒提取质粒时请参考具体试剂盒的操作说明。
Ⅱ.碱裂解手提法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下:
1:接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2mlLB培养基。
2:37℃振荡培养过夜。
3:取1.5ml菌体于Ep管(离心管),以4000rpm离心3min,弃上清液。
4:加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/LEDTApH8.0,25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合。
5:加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH,1%SDS),轻轻翻转混匀,置于冰浴5min.
6:加入0.15m1预冷溶液III(5mol/LKAc,pH4.8),轻轻翻转混匀,置于冰浴5min.
7:以10,000rpm离心20min,取上清液于另一新Ep管
8:加入等体积的异戊醇,混匀后静置10min.
9:以10,000rpm离心20min,弃上清。
10:用70%乙醇0.5ml洗涤一次,抽干所有液体。
11:待沉淀干燥后,溶于50ulTE缓冲液中(或60℃温育去离子水
三、公司服务
         客户提供:无污染的质粒样品
         公司提供:我公司依据客户需求,可以提供多种类型的质粒DNA抽提服务,制备的质粒DNA没有RNA的污染,内毒素可低于50EU/mg。