（一）、血浆样本采集

1. 请用EDTA抗凝管采集患者血液（a），若不能第一时间处理，请于4℃临时保存（不得超过4 h）；

2. 将采集到的血液在4℃下1500 g，离心20 min，去除血液中的细胞；

3. 取上清，4℃下3000 g，离心15 min，收集上清（血浆），-80℃保存。

送样量： 排阻+超滤        4mL（够2次分离）

超离 4mL

注意事项：1. 请勿使用含肝素抗凝剂的采样管收集盛放；

2. 请排除乙肝病毒，HIV等病毒感染样本。

（二）、血清样本采集

1. 请用EDTA抗凝管采集患者血液（a），若不能第一时间处理，请于4℃临时保存（不得超过4 h）；

2. 将采集到的血液在4℃下1500 g，离心20 min，去除血液中的细胞；

3. 取上清，4℃下13000 g，离心2 min，收集上清（血清），-80℃保存。

送样量：超离 4 mL

排阻+超滤        1mL

注意事项：1. 请排除乙肝病毒，HIV等病毒感染样本。

（三）、尿液样本采集

1. 采集前/中后段晨尿约60 mL，若不能第一时间处理，请于4℃临时保存（不得超过8 h）；

2. 将采集到的尿液在4℃下（室温亦可）离心2000 g，20 min，去除尿液中的细胞；-80℃保存。

3. 送样量：60 mL。

注意事项：

请务必嘱咐患者，i)采集晨尿，或6 h以上未排尿亦可；ii)中段尿请务必去掉最初排出的50-80 mL尿液；iii）女性受试者，请于采尿前对外阴进行清洗。

（四）、胸水样本采集

1. 临床收集胸水后若不能第一时间处理，请于4℃临时保存（不得超过8 h）；

2. 将收集到的胸水1000 g离心10 min，收集上清液；

3. 将得到的胸水上清3000 g离心10 min，收集上清，-80℃保存。

送样量：30 mL

（五）、腹水样本采集

1. 临床收集腹水后若不能第一时间处理，请于4℃临时保存（不得超过8 h）

2. 将采集到的腹水在4℃下（室温亦可）离心2000 g，20 min，去除腹水中的残渣；-80℃保存。

送样量：30 mL。

（六）、脑脊液样本采集

1. 采集方式为腰椎穿刺，样本一经分离，请务必立即置于冰上或4℃短暂保存（不得超过4 h），采样时注意避免血液污染；

2. 样本室温下2000 g离心20 min去除细胞及部分碎片，取上清，-80℃保存。

送样量：5 mL

注：请勿使用含肝素抗凝剂的采样管收集盛放。

（七）、胆汁样本采集

1. 用无菌容器收集胆汁；

2. 将收集到的胆汁在4℃下，3000 g离心10 min去除细胞沉渣和碎片

3. 收集胆汁上清液，4℃或者-20℃长期保存。

送样量：5 mL

（八）、细胞样本采集

对于耐受无血清培养的细胞的处理流程：

1）细胞培养：对于贴壁细胞汇合密度在70%以上，用PBS洗涤细胞2-3遍去除残留牛血清，添加无血清培养基，继续培养24小时。

2）上清收集：细胞上清先用200-300g离心10min，再用3000g离心10min，最后0.22um过膜或者10000g离心30min。将处理后的细胞上清经100kd超滤管超滤浓缩。（详见参考文献2.1）

3 ) 储存运输：将处理好的细胞上清收集在无菌培养瓶，-80保存或者干冰运输，体积需求细胞上清原液大于200ml（对应于10cm的大皿，至少需要20大皿）

4）对于一些状态良好的细胞上清，少至70ml，也可以得到较好的外泌体分离结果。

对于不耐受无血清培养的细胞的处理流程：

1）细胞培养：对于贴壁细胞汇合密度在70%以上，用PBS洗涤细胞2-3遍去除残留牛血清，添加含5%无外泌体血清的培养基，继续培养24小时。

2）上清收集：细胞上清先用200-300g离心10min，再用3000g离心10min，最后0.22um过膜或者10000g离心30min。将处理后的细胞上清经100kd超滤管超滤浓缩。（详见参考文献2.1）

3 ) 储存运输：将处理好的细胞上清收集在无菌培养瓶，-80保存或者干冰运输，体积需求细胞上清原液大于200ml（对应于10cm的大皿，至少需要20大皿）

4）对于一些状态良好的细胞上清，少至70ml，也可以得到较好的外泌体分离结果

送样量：细胞上清原液建议大于200 mL。

注：细胞上清样本按照送样体积收费，超滤浓缩步骤可选择自己完成也可直接送公司完成。