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说明书：

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BioAssay Systems品牌：碱性磷酸酶检测试剂盒

BioAssay Systems品牌：碱性磷酸酶检测试剂盒

  碱性磷酸酶的活性检测试剂盒。常用于检测培养的成骨细胞、实验动物血清和骨组织中的碱性磷酸酶活性。

  碱性磷酸酶（ALP）广泛分布于肝脏、骨、小肠之中。特别在骨代谢研究领域方面被用作为骨形成指标之一。本品是用p-硝基苯磷酸作为底物的碱性磷酸酶检测试剂盒，根据测量p-硝基苯磷酸分解产物p-硝基酚的吸光值，检测样品中碱性磷酸酶活性。

·检测原理

  本品是用p-硝基磷酸作为底物的碱性磷酸酶检测试剂盒，根据测量p-硝基苯磷酸分解产物p-硝基酚的吸光值，检测样品中碱性磷酸酶活性。

·试剂盒组成

1.基质片——20片

2.基质溶解液——100mL×1瓶

3.终止液——100mL×1瓶

4.标准液——10mL×1瓶

·性能

·检量线范围：0.0625~0.5mmol/L

·检测时间：约20min

·样品量：20uL

·测定波长：405nm

试剂的配制

1.底物缓中液：1片底物溶解于5mL底物溶解液中。

2.反应终止液：直接使用。

3.系列稀释标准液：将标准液用蒸馏水依次稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625mmol/L等2倍率稀释液系列。

标准操作法

  向96孔微孔板内添加100uL底物缓中液和20uL样品，在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后，37℃婚育15min。

  添加80uL反应终止液，在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后，用酶标仪测量405nm处的吸光值。同样方法进行空白（蒸馏水）对照和标准品的检测。

活性单位的定义

  在pH9.8，37℃情况下，1分钟内生成1nmol p-硝基酚所需的酶，酶活性为1个活力单位（U）。

  活性（U/uL）=C/15×a 

C：由标准曲线得到的OD值（A实验值减去A空白值），计算p-硝基酚浓度（mmol/L=nmol/uL）

  15：反应时间（min.）

a：样品的稀释倍数

  当样品为成骨细胞时，本试剂盒使用前需要预处理。

  在48孔板上进行细胞培养后，除去培养基，用PBS冲洗感光板，各孔添加150uL 0.05%的曲拉通X，进行冻结

→融化一→冻结→融化操作。4℃，15,000rpm离心15min处理，将上清液移到新的辅助管，以此作为样品。

（注1）：48孔板：培养时，一般不采用96孔板，多使用48孔板。

（注2）：曲拉通X的作用：溶解细胞膜，回收蛋白（细胞内含有ALP蛋白）的试剂。

（注3）：反复的冻结融化：原理不明，但这样做似乎可以提高ALP活性。

（注4）：也有不使用曲拉通X，用超声波降解法（超声波处理）对细胞造成物理性休克得到溶解产物的方法。

（注5）：曲拉通X的添加量：以150L为例，孔中细胞约为20,000 cells。

·参考文献

[1]lto，S.et al.：J.Pharmacol.Exp.Ther，333，341（2010）.小鼠肾脏组织提取液

[2]lwakura，T.et al.：J.Orthop.Res，27，208（2009）.人培养细胞提取液

[3]Furuya，Y.et al:J.Biol.Chem，286，37023（2011）.小鼠血清

[4]ltoh，T.et al:J.Biol.Chem，284，19272（2009）.小鼠培养细胞提取液

·LabAssay™ 系列产品

   LabAssay™ 系列产品是以人、小鼠等动物样品为检测对象的生物化学检测用试盒。使用微孔板进行检测，因此仅需少量样品即可检测，且一次可进行多样品检测。

本次还新推出了可检测氨中短元素的“LabAssay™ Ammonia（氮检测试剂盒）”。

 LabAssay™系列产品仅供实验研究用，不能用于临床诊断。