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NKT细胞强力激活剂.pdf

·原理

  KRN7000是人和小鼠自然杀伤T细胞（NKT细胞）的配体，在各种小鼠体内实验模型中，比如皮下移植模型、肝脏或者肺的转移模型等，KRN7000可刺激产生干扰素（IFN），起着抗肿瘤活性的作用。在肝脏转移模型中，使用KRN7000治疗后，能够抑制肿瘤生长，延长小鼠寿命。据报道，在患有传染病，自身免疫性疾病和移植物抗宿主病等小鼠身上使用KRN7000后，会产生免疫效果。

  自然杀伤T细胞（NKT细胞）被激活后会分泌大量的细胞因子，并能分化成具有细胞毒作用的效应细胞。临床研究发现NKT细胞参与部分疾病的调节，尤其是参与了自身免疫病，抗肿瘤和器官移植的抗排斥反应的调节。特别是NKT细胞在一些自身免疫性疾病如硬皮病，I型糖尿病及肝炎等具有免疫保护作用。

  目前已知对NKT细胞的刺激效应最佳的物质是脑苷脂-a-半乳糖酰基鞘胺醇（a-Galactosyl cermaide，α-GalCer，KRN7000），这类物质来源于海绵动物。1993年由日本Kyowa Hakko Kirin公司首次合成并命名。尽管KRN7000对NKT细胞的天然调节作用不明，但它作为一种NKT细胞强有力的活化剂，在体内体外实验中非常有用，NKT细胞通过这种机制活化后，随后会激活NK细胞。

基本信息

化学名：（2S，3S，4R）-1-O-（α-D-galactosyl）-N-hexacosanoyl-2-amin-1,3,4-octadecanetriol

分子式：C₅₀H₉₉NO₉ 

M.W.：858.32

·优点

·抑制肿瘤生长

·产生免疫效果

·案例·应用

   体内注射：KRN7000可溶于以下溶液：5.6%蔗糖，0.75%L-组氨酸，0.5%吐温-20。混合后，加热至80℃，直至KRN7000完全溶解。将溶液冻干后，冻干粉易溶于水。

   体外实验：KRN7000可溶于DMSO，终浓度为1mg/mL，加热至80℃得到澄清溶液。

案例1

   使用KRN7000用于鉴定小鼠组织或者人血液样品中iNKT细胞（CD1d限制性恒定NKT细胞）。iNKT细胞受体由小鼠中恒定的Va14Ja18/Vb8.2和人Va24Ja18/Vb11组成。这两种物种的iNKT细胞抗原受体都识别MHC I样CD1d递呈的α-galactosylceramide（α-GalCer，KRN7000）。使用流式检测α-GalCer装置的CD1d二聚体即可进行分析。从5～6只小鼠胸腺，脾脏或者肝脏可以纯化1×10⁶iNKT细胞，大概需要1～2小时从小鼠组织制备单核细胞，用磁珠大概1.5小时富集细胞，4小时用流式检测和纯化iNKT细胞。如果样品是人的PBMCs（外周血单核细胞），大概需要2小时，需要5mL血液获得5×10⁶PBMCs，含有500～25,000iNKT细胞。

摘自：Hiroshi Watara，et al，Nature Protoco（2008）VOL.3 N0.1

案例2

  肉状瘤病是系统失调疾病，可能与Th1应激有关。在患有non-remitting肉状瘤病病人外周血中Va24 NKT细胞数目减少，但是在肉芽肿病灶部位这些细胞有积累。用KRN7000刺激来自上述病人外周血的Va24NKT细胞，IFN-gamma的分泌量明显比正常人少，但是IL-4的水平差不多。只有在Va24 NKT中观察到IFN-gamma分泌减少，在常规的CN4T细胞中没有变化。表明non-remitting肉状瘤病与Va24 NKT不能分泌足够IFN-gamma有关，同时也说明Va24NKT细胞在肉状瘤病的病理有关。

摘自：Seiichiro Kobayashi1，et al，international immunolgy，Vol.16，N0.2，pp 215-222

案例3

   KRN7000是人和小鼠NKT细胞的配体，在各种小鼠体内实验模型中，比如皮下移植模型、肝脏或者肺的转移模型等，KRN7000可刺激产生干扰素（IFN），起着抗肿瘤活性的作用。在肝脏转移模型中，使用KRN7000治疗后，能够抑制肿瘤生长，延长小鼠寿命。据报道，在患有传染病，自身免疫性疾病和移植物抗宿主病等小鼠身上使用KRN7000后，会产生免疫效果。

·参考文献

[1] Tashiro,T., et al. Int. lmmunol.,22(4),319～328(2010).

[2] Emoto,M, et al. Infection and Immunity,78(6),2667～2676(2010).

[3] Sasakawa,A.. et al.J. Hepatol.50(6),1155~1162(2009).

[4] Kamijuku,H., et al.,. Mucosal lmmunol,3,208～218(2008).

[5] lshi,Y, et al.. Front. Biosci.,13,6214～6228(2008).

[6] Shimizu,K, et al.,J. Exp. Med.,204,2641~2653(2007).

[7] Kronenberg.M.. Annu. Rev. lrmmunol..23,877~900(2005).