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上海宇劲生物孙经理 
| 品牌 | 货号 | 产品名称 | 规格 | 目录价 |
| Funakoshi | F015 | UltraRIPA kit for Lipid Raft UltraRIPA 脂筏提取缓冲液套装 | 1 kit | 4100 |
产品说明书：
FAQ：
产品宣传单页：
·细胞膜上的不溶性成分——脂筏（Lipid Raft）
裂解细胞进行蛋白质功能分析的时候，经常会使用RIPA（Radio-lmmuno Precipitation Assay）缓中液和1%Triton X-100缓中液等的相对温和的细胞膜裂解缓中液。这些缓中液对蛋白质的构造和功能的影响小，适用于酶活性试验、免疫沉降和各种结合实验等蛋白质的功能分析。另一方面，与具有很强的蛋白质变性作用的SDS缓中液相比，增溶能力较弱，完全不能溶解以脂筏（Lipid Raft）为主的细胞膜组分。许多表面活性剂都不能溶解脂筏，故其又被称为Detergent Resistant Membrane（DRM）。DRM中所含蛋白质的功能分析被认为是十分困难的。
脂筏（Lipid Raft）是由胆固醇（cholesterol）和磷脂（sphingomyelin），GPl锚定蛋白（GPI anchor protein）和棕榈酰化（palmitoylation）蛋白质组成的细胞膜构造，被认为是整合各种功能蛋白的功能域。神经细胞突触和免疫细胞的免疫突触是脂筏的代表性例子。
·特点
·操作简单，能快速提取脂筏蛋白
·使用两种类型的缓中液（A buffer，Bbuffer）进行两个阶段的提取。先提取出胞浆蛋白和非脂筏蛋白，然后提取脂筏蛋白
·Buffer提取的任何蛋白质都不会失活
·A buffer和一般的RIPA buffer成分相同*。B buffer含有表面活性剂，可以通过透析除去
·适用于哺乳动物细胞/组织
·使用本品配制的溶解液适用于酶活性试验、免疫沉淀（Immunoprecipitation）、蛋白定量（BCA法）、SDS-PAGE和Western blot等
*1% NP-40 Alternative，0.1%SDS，50 mMTris-HCI（pH8.0），150 mMNaCl，0.5%Sodium Deoxycholate
·缓冲液套装组成
·A buffer(RIPA buffer)(100 mL)
·B buffer(10mL)
·各buffer组成：
·SDS buffer（2%SDS，1%Triton X-100，50 mM HEPES·Na（pH 7.2），150 mMNaCl）
·UItraRIPA kit A buffer（1%NP-40 Alternative，0.1%SDS，50 mMTris-HCI（pH8.0），150 mMNaCl，
0.5%Sodium Deoxycholate）
·UltraRIPA kit B buffer（成分保密）
·1%Triton X-100（1%Triton X-100，50 mM HEPES·Na（pH 7.2），150 mMNaCl）
·使用方法
1、用A buffer溶解组织或培养细胞。
为了提高溶解效率，推荐使用均质或超声波破碎设备。
2、进行离心分离，使A buffer中可溶性组分（上层清液）和不溶性组分（沉淀）分离，分别回收。上层清液A buffer可溶性组分中主要含有胞浆蛋白和非脂筏蛋白。
3、往沉淀的A buffer不溶性组分中加入B buffer，形成悬浊液。
4、进行离心分离，与步骤2一样分离出可溶性组分（上层清液）和不溶性组分（沉淀），分别回收。上层清液的Bbuffer可溶性组分中含有脂筏蛋白。
5、可应用于各种实验。
*A buffer和B buffer不可用于Bradford法蛋白质定量。蛋白质定量请使用BCA检测。
*使用本品A buffer和B buffer进行两个阶段的提取是最适宜的，也有只对细胞使用B buffer进行溶解和提取的例子。具体请参照以下例子。
UItraRIPA kit、1%SDS buffer和RIPA buffer的比较
| 蛋白分离 | 蛋白结构 | 蛋白功能 | 应用 | |||
| 胞质蛋白 | 膜蛋白 | |||||
| 非脂筏蛋白 | 脂筏蛋白 | |||||
| 1%SDS buffer | 〇 | 〇 | 〇 | ✖ | ✖ | SDS-PAGE |
| RIPA buffer | 〇 | 〇 | ✖ | 〇 | 〇 | 酶分析法测定 免疫沉淀 SDS-PAGE等 |
| UItraRIPA | 〇 | 〇 | 〇 | 〇 | 〇 | |
·应用实例
从脂筏中提取总蛋白
用UItraRIPA kit A buffer溶解小鼠全脑组织后，回收A buffer不溶性组分（RIPA-insoluble fraction），添加2%SDS，RIPA buffer 和UltraRIPA kit B buffer进行提取。提取后的总蛋白用SDS-PAGE/银染色检测（左），用BCA法定量蛋白质（右）。相对于具有很强的蛋白质变性作用的2%SDS编中液，UItraRIPA kit能够提取70%以上的蛋白质。
*不能保证全部蛋白质的可溶性都得到改善。
脂筏标记蛋白的提取
用UItraRIPA kit A buffer溶解小鼠全脑组织后，回收A buffer不溶性组分（RIPA-insoluble fraction），添加2%SDS，RIPA buffer 和UltraRIPA kit B buffer，提取后进行SDS-PAGE。利用对应脂筏标记蛋白的抗体进行Western blot检测。
脂筏标记蛋白的免疫沉淀
用UItraRIPA kit A buffer溶解小鼠全脑组织后，回收A buffer不溶性组分，通过B buffer提取脂筏标记蛋白。
对bufer提取物使用脂筏标记蛋白PSD95的抗体和G蛋白偶联磁珠进行免疫沉淀。使用银染色和抗PSD95抗体通过Western blot检测进行确认。
提取的蛋白质的酶活性测定
用1%TritonX100，RIPA buffer，UltraRIPA kit B buffer 和2%SDS溶解CHO细胞，测定溶解物中乳酸脱氢酶（LDH）的活性。2%SDS具有很强的蛋白质变性作用，在几乎完全失活的情况下，1%Triton X100，UItraRIPAkit A buffer，和UltraRIPA kit B buffer所得的酶活性大致相同。
从脂筏中提取功能蛋白
用UItraRIPA kit A buffer溶解小鼠全脑组织后，回收A buffer不溶性组分。用A buffer分三次冲洗不溶性组分，消除RIPA可溶性组分中脱磷酸酶的活性。往不溶性组分中分别添加2%SDS buffer，A buffer（RIPA buffer）和B buffer，测定各种提取物的总脱磷酸化酶活性。下图是各缓中液从RIPA不溶性组分中提取的蛋白质的量（左轴：黑）和所检测的脱磷酸酶的活性（右轴：红）的示意图。2%SDS buffer能多从RIPA不溶性组分中很好地提取蛋白质，但容易导致蛋白质变性，完全失去脱磷酸化活性。RIPA buffer不能提取蛋白质，活性也无法检测。
UItraRIPA kit B buffer所提取的蛋白质大约为2%SDS buffer的70%，且可以检测出较强的脱磷酸化活性。
UItraRIPA kit B buffer单独提取脂筏蛋白的可能性评价
数据提供：东京大学药学院研究生院保健化学系
用PBS冲洗COS-1细胞，分别使用SDS buffer，1%Triton X-100 buffer，UltraRIPA kit A buffer和UItraRIPA kit B buffer裂解，通过离心分离（14，000rpm，5min，4℃）可溶性组分和不可溶性组分。不可溶性组分用等量的SDS-PAGE样品缓中液变性溶解。脂筏标记Flotilin1的可溶部分通过SDS-PAGE/western blot测定。使用1%Triton X-100和RIPA buffer，大部分的Flotilin 1不溶性膜组分没有被溶解，而UltraRIPA kit B buffer几乎可以全部溶解。
欲了解更多相关产品信息，请点击文字：ULTRARIPA Kit 应用数据
·参考文献
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